病毒学报2017年第4期导读二
10.人类免疫缺陷病毒1型gp包膜蛋白三聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定
杨超，张芝晴，沈鸿霖，高双全，李少勇，李少伟，夏宁邵，顾颖
摘要：
本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）gp编码基因的密码子和克隆设计，从而实现在T哺乳动物细胞中高效表达，并对纯化获得的gp蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp克隆构建，通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、三聚体折叠序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEKT细胞进行gp蛋白表达，采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Westernblot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%，每升培养基可获得0.5mggp蛋白，并且具有良好的抗原活性，电镜下呈现三聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠，检测小鼠免疫血清显示gp蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp蛋白，为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。
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